潔凈 實(shí)驗(yàn)室要求：
1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)清潔、衛(wèi)生、安靜，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙和飲食。
2實(shí)驗(yàn)人員必須穿戴工作衣帽，工作服經(jīng)常洗滌、消毒、保持清潔。
3操作前后或離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室必須用肥皂或消毒液洗手。
4發(fā)生菌液污染臺(tái)面或地面，應(yīng)立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內(nèi)傾覆其上，1小時(shí)后再擦拭，如為破傷風(fēng)梭菌，則應(yīng)隔夜后再擦洗。
5工作衣、帽、口罩受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫下使污染部位包裹在內(nèi)部，高壓滅菌后再清洗。
6如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應(yīng)先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內(nèi)泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。
7接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過(guò)火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質(zhì)、油質(zhì)的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時(shí)，不應(yīng)立即在火焰上灼燒，應(yīng)先在內(nèi)焰里將油質(zhì)培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。
8帶菌的吸管應(yīng)浸泡在5％甲酚消毒液內(nèi)24h后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應(yīng)在121℃高壓滅菌30分鐘后再取出清洗。
9在接種霉菌、放線菌時(shí)應(yīng)在鋪有浸過(guò)消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。
10廢棄物的處理：

1. 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
2. 污染性銳器（如一次性針頭）應(yīng)滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。
3. 污染性可重復(fù)使用的材料（如平皿）應(yīng)滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。
4. 工作服（含潔凈工作服）應(yīng)定期清洗，懷疑污染的工作服應(yīng)滅菌后清洗，潔凈工作服應(yīng)滅菌后使用。

 無(wú)菌操作要求：
無(wú)菌操作是指在無(wú)菌的環(huán)境條件下，使用無(wú)菌器材，防止微生物污染的操作技術(shù)。即保持待檢樣品在操作時(shí)不被污染，又要防止被檢的微生物及陽(yáng)性對(duì)照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無(wú)菌及微生物操作的工作人員必須經(jīng)過(guò)無(wú)菌技術(shù)及基礎(chǔ)微生物學(xué)專業(yè)知識(shí)的學(xué)習(xí)及培訓(xùn)才具備上崗操作的資格，微生物專業(yè)檢驗(yàn)人員也不應(yīng)該頻繁地變換工作崗位。
1.無(wú)菌室應(yīng)每次使用前后用0.1%苯扎溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作臺(tái)面及可能污染的死角，濕拖地面，打開(kāi)無(wú)菌空氣過(guò)濾器及超凈工作臺(tái)的開(kāi)關(guān)30分鐘，紫外線殺菌燈照射1小時(shí)。
2.操作人員用肥皂洗手后進(jìn)入緩沖間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝?nèi)ヅＦぜ埣巴獍b，從傳遞窗移入操作間，再用0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進(jìn)入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度3－5cm）操作。
3供試品表面消毒，如為安瓿先用砂輪劃痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌污染供試品。
5在無(wú)菌操作中切勿大幅度或快速動(dòng)作、拖行，以免攪動(dòng)空氣中塵埃微粒。
6注射器如需回抽時(shí)，應(yīng)對(duì)著火焰吸入無(wú)菌空氣。
7所用的器材如培養(yǎng)基、稀釋劑配制后經(jīng)濕熱滅菌121℃30分鐘，吸管培養(yǎng)皿等均應(yīng)洗滌，干燥，包扎后經(jīng)干熱滅菌160℃2小時(shí)才能使用。

消毒劑的質(zhì)量控制 

（一）消毒劑安全使用原則

1.正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。

2.正確選擇使用濃度，確保消毒效果。

3.正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。

4嚴(yán)格掌握消毒時(shí)間。

5.定期更換，避免產(chǎn)生耐藥性。

6.不聯(lián)用和混合使用。

7消毒前，應(yīng)進(jìn)行清潔。

（二）消毒劑的種類 

1.高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見(jiàn)的有過(guò)氧乙酸、甲醛、環(huán)氧乙烷和含氯消毒劑

2.中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強(qiáng)的結(jié)核桿菌和其他細(xì)菌、真菌和大多數(shù)病毒，常見(jiàn)的有乙醇、苯扎溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等

3.低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結(jié)核桿菌以外的抵抗力較弱的細(xì)菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見(jiàn)的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等

消毒劑配制

1.根據(jù)消毒劑使用區(qū)域和對(duì)象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：

第一類消毒劑，專用于普通實(shí)驗(yàn)區(qū)，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；

第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；

第三類消毒劑，專用于無(wú)菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的手部消毒和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。

2.配制

第一類消毒劑的配制方法：不需使用無(wú)菌器具，可直接在普通實(shí)驗(yàn)區(qū)按消毒劑使用說(shuō)明書(shū)的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。

第二類消毒劑的配制方法：不需使用無(wú)菌器具，應(yīng)在更衣室內(nèi)按消毒劑使用說(shuō)明書(shū)的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。

第三類消毒劑的配制方法：需要使用無(wú)菌器具并在無(wú)菌操作間內(nèi)配制。首先取一次性集菌過(guò)濾器一個(gè)，將排液口放置在滅菌過(guò)的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過(guò)薄膜過(guò)濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無(wú)菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑制備后，應(yīng)收集消毒劑中的微生物）

環(huán)境監(jiān)控

（一）目的：

確定工作臺(tái)面、設(shè)備表面的消毒效果和消毒頻次，確定潔凈室的綜合性能以及進(jìn)行維護(hù)的時(shí)機(jī)，確定培養(yǎng)箱的污染情況，判斷是否有必要進(jìn)行徹底消毒。

（二）環(huán)境監(jiān)控的對(duì)象

1.樣品貯存的環(huán)境

2.培養(yǎng)基制備的環(huán)境

3.樣品制備和檢驗(yàn)的環(huán)境

4.培養(yǎng)的環(huán)境

（三）環(huán)境監(jiān)控的方法

1.表面微生物數(shù)

• 擦拭法（棉拭子法）
• 淋洗法
• 影印盤(pán)法（RODAC法）

2.空氣微生物數(shù)

• 沉降菌法     浮游菌法

浮游菌數(shù)的測(cè)定：采用浮游菌測(cè)定儀。
沉降菌數(shù)測(cè)定：方法：無(wú)菌室及凈化工作臺(tái)面消毒擦拭后，打開(kāi)層流凈化裝置及凈化工作臺(tái)開(kāi)關(guān)30min，將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板3個(gè)及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個(gè)（直徑9cm），置凈化工作臺(tái)左、中、右各1個(gè)，開(kāi)蓋暴露30min后將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h及25－28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h，細(xì)菌和真菌平均菌落數(shù)小于等于1個(gè)為100級(jí)。實(shí)驗(yàn)室一旦被污染，潔凈度達(dá)不到要求，可以清洗或更換凈化工作臺(tái)過(guò)濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個(gè)燒杯（內(nèi)裝少許甲醛，8ml／平方米），下面放一個(gè)裝有少許乙醇的乙醇燈，點(diǎn)燃后，關(guān)閉門(mén)窗，乙醇用盡后燈自滅，甲醛蒸氣充滿無(wú)菌室，密閉24h。
缺點(diǎn)：甲醛蒸氣易銹蝕儀器，對(duì)人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對(duì)人眼的刺激。
 

環(huán)境監(jiān)控的評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.表面微生物數(shù)

1.1需氧嗜溫菌小于5cfu/cm2，合格

1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進(jìn)一步調(diào)查

1.3需氧嗜溫菌大于25cfu/cm2，不合格，應(yīng)立即消毒處理

2.空氣微生物數(shù)

沉降菌大于15cfu/板，應(yīng)暫停工作，進(jìn)行消毒